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ELISA的检测结果的基础条件点击次数:371 发布时间:2019-05-22


ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。
本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试
剂均与特殊仪器配合应用,严格遵照规定操作,必能得出
准确的结果。
  可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物
(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行
测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检
测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制
备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。
血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。
  血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。
一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清
融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂(见3.2.4)。
 


  按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。


  在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。
  加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以发
生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀的
血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其加
入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。

 

徐小姐
朱小姐
 
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